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Nature Protocols:GlYcoLISA:基于LC–MS讀數的免疫吸附測定的抗原特異性和亞類特異性IgG Fc糖基化分析
吳宗涵 吳宗涵 2024-02-23

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免疫球蛋白G(IgG)片段可結晶(Fc)糖基化調節效應器功能,如抗體依賴性細胞毒性和補體依賴性細胞毒。因此,評估IgG-Fc糖基化對于理解抗體在感染性、同種免疫性和自身免疫性疾病中的作用很重要。鑒于此,來自萊頓大學醫學中心Manfred WuhrerDavid Falck等人開發了GlYcoLISA,一種通過液相色譜-質譜(LC–MS)讀數的免疫吸附測定法測定抗原特異性IgG的Fc糖基化的技術。具有足夠聚糖分辨率的替代方法缺乏這些重要的特異性。

文章要點:

1) 該技術主要是通過蛋白水解切割后基于LC–MS的糖肽分析,以亞類和位點特異性的方式檢測抗原特異性IgG糖基化,GlYcoLISA通過使用公認的免疫吸附測定法,利用固定化抗原純化所需特異性的抗體,解決了與特異性IgG的低豐度和總IgG的高背景有關的挑戰;

2) 此外,GlYcoLISA以96孔板型進行,160個樣品的分析耗時約5天,其中1天用于樣品制備,2天用于LC–MS測量,2天進行部分自動化數據處理,當然,研究也提到GlYcoLISA需要LC–MS操作和數據處理方面的專業知識。

參考資料:

Falck, D., Wuhrer, M. GlYcoLISA: antigen-specific and subclass-specific IgG Fc glycosylation analysis based on an immunosorbent assay with an LC–MS readout. Nat Protoc (2024).

10.1038/s41596-024-00963-7

https://doi.org/10.1038/s41596-024-00963-7


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